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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-0593ST豬睪丸細(xì)胞系

ST豬睪丸細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-0593
簡(jiǎn)要描述:

ST豬睪丸細(xì)胞系,成纖維樣,貼壁生長(zhǎng),對(duì)豬瘟病毒等敏感,可用于豬源病毒分離、疫苗研發(fā)及抗病du藥物篩選,是動(dòng)物病毒學(xué)研究常用細(xì)胞系。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

ST豬睪丸細(xì)胞系
ST豬睪丸細(xì)胞系,ST 細(xì)胞系是從豬睪丸組織分離建立的成纖維樣細(xì)胞系,因?qū)Χ喾N豬源病毒具有廣譜敏感性且能穩(wěn)定傳代,成為動(dòng)物病毒學(xué)研究、豬用疫苗研發(fā)及抗病du藥物篩選的重要模型。其保留了豬源細(xì)胞的生理特征,在豬瘟病毒、口蹄疫病毒等多種病毒的培養(yǎng)中表現(xiàn)突出,為解析豬源病毒感染機(jī)制、開(kāi)發(fā)防控技術(shù)提供了接近自然感染狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)平臺(tái),尤其在基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的病毒分離與鑒定中具有不可替代的價(jià)值。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來(lái)源與建立背景

ST 細(xì)胞系源自 1960 年美國(guó)學(xué)者從新生仔豬睪丸組織分離的原代細(xì)胞,經(jīng)yi酶消化法連續(xù)傳代獲得永生化表型(“ST" 代表豬睪丸來(lái)源)。該細(xì)胞系因?qū)ωi瘟病毒的高效支持能力,1975 年被確立為豬源病毒研究的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系,解決了原代豬腎細(xì)胞、肺細(xì)胞傳代次數(shù)有限、批次差異大的問(wèn)題,成為首ge能穩(wěn)定培養(yǎng)多種豬源病毒的豬源細(xì)胞系。
  1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特征

細(xì)胞呈典型成纖維樣形態(tài),貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈長(zhǎng)梭形,排列疏松呈放射狀或漩渦狀,胞質(zhì)豐富,細(xì)胞核呈橢圓形(核質(zhì)比約 1:4),核仁清晰可見(jiàn)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,倍增時(shí)間約 24-28 小時(shí)(顯著短于猴源細(xì)胞系),傳代比例 1:5 至 1:8,每周換液 2 次以維持細(xì)胞密度在 50%-60%。細(xì)胞凍存復(fù)蘇存活率超 90%,連續(xù)傳代 300 次后仍保持穩(wěn)定核型(38 條染色體),病毒敏感性無(wú)顯著下降,適合大規(guī)模實(shí)驗(yàn)與生產(chǎn)。
  1. 功能特性

  • 病毒受體表達(dá):表達(dá)多種豬源病毒受體,如豬瘟病毒受體 CD46(陽(yáng)性率 90%)、口蹄疫病毒受體整合素 β1(陽(yáng)性率 85%),其受體表達(dá)譜覆蓋 80% 以上的常見(jiàn)豬源病毒,為廣譜病毒培養(yǎng)提供分子基礎(chǔ);與猴源細(xì)胞系相比,豬源特異性受體的同源性達(dá) 98%,更接近自然感染的受體結(jié)合狀態(tài)。

  • 病毒敏感性譜:對(duì)豬瘟病毒、口蹄疫病毒、豬圓環(huán)病毒 2 型等 10 余種豬源病毒具有高度敏感性,豬瘟病毒感染后 48 小時(shí)出現(xiàn)典型細(xì)胞病變(顆粒增多、脫落),病毒滴度達(dá) 10? TCID??/mL;對(duì)口蹄疫病毒的支持能力優(yōu)于 Marc145 細(xì)胞,病毒增殖效率提升 30%,且能保持病毒的免疫原性。

  • 代謝適應(yīng)性:具有強(qiáng)大的營(yíng)養(yǎng)代謝能力,在含 5% 血清的培養(yǎng)基中仍可正常生長(zhǎng),乳酸代謝速率是 Vero 細(xì)胞的 2 倍,適合低成本大規(guī)模培養(yǎng);同時(shí)能分泌多種細(xì)胞因子(如 IL-6、TNF-α),模擬體內(nèi)病毒感染后的免疫微環(huán)境。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 豬源病毒研究與疫苗開(kāi)發(fā)

  • 病毒分離與鑒定:作為基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的shou選細(xì)胞系,ST 細(xì)胞可從豬糞便、口腔拭子等樣本中分離豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒等,分離率達(dá) 85%(顯著高于猴源細(xì)胞系的 60%),且能通過(guò)細(xì)胞病變形態(tài)初步區(qū)分病毒類型,為疫病快速診斷提供依據(jù)。2018 年我國(guó)非洲豬瘟疫情初期,該細(xì)胞系曾用于排除其他常見(jiàn)豬病毒感染。

  • 疫苗生產(chǎn)與效力評(píng)價(jià):在豬瘟滅活疫苗生產(chǎn)中,ST 細(xì)胞的病毒產(chǎn)量達(dá) 10?.? PFU/mL,較原代豬腎細(xì)胞提升 15 倍,疫苗免疫仔豬后中和抗體效價(jià)達(dá) 1:128,保護(hù)率超 95%,且生產(chǎn)成本降低 50%,我國(guó)多數(shù)豬瘟疫苗生產(chǎn)企業(yè)采用該細(xì)胞系。

  1. 抗病du藥物篩選與診斷技術(shù)開(kāi)發(fā)

  • 藥物篩選模型:基于其廣譜病毒敏感性,建立多病毒高通量篩選體系,日均可檢測(cè) 150 種化合物。通過(guò)該模型發(fā)現(xiàn)的中藥提取物對(duì)豬瘟病毒和口蹄疫病毒均有抑制作用,病毒滴度下降 100 倍以上,且對(duì)細(xì)胞毒性低,為復(fù)方抗病du藥物研發(fā)提供候選成分。

  • 診斷試劑生產(chǎn):利用其高效表達(dá)病毒抗原的特性,制備多病毒聯(lián)檢 ELISA 試劑盒,可同時(shí)檢測(cè)豬瘟、口蹄疫等 5 種病毒抗體,靈敏度達(dá) 90%,特異性 92%,檢測(cè)時(shí)間縮短至 2 小時(shí),被廣泛用于規(guī)?;i場(chǎng)的疫病監(jiān)測(cè)。

  1. 病毒感染機(jī)制與跨物種傳播研究

  • 受體結(jié)合機(jī)制:通過(guò) ST 細(xì)胞研究豬瘟病毒與 CD46 的相互作用,發(fā)現(xiàn)病毒 E2 蛋白的第 138 位氨基酸是結(jié)合關(guān)鍵位點(diǎn),突變后病毒感染力下降 90%,為受體阻斷劑設(shè)計(jì)提供靶點(diǎn)。

  • 跨物種傳播模擬:將人源 ACE2 受體導(dǎo)入 ST 細(xì)胞,可構(gòu)建豬 - 人跨物種病毒傳播模型,用于評(píng)估豬流感病毒對(duì)人類的感染風(fēng)險(xiǎn),實(shí)驗(yàn)顯示 H1N1 豬流感病毒在該模型中的復(fù)制效率是普通 ST 細(xì)胞的 5 倍,與人類肺細(xì)胞的相關(guān)性達(dá) 80%。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:DMEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 青mei素 - 鏈mei素,pH 維持在 7.2-7.4;大規(guī)模生產(chǎn)可采用無(wú)血清培養(yǎng)基(含重組生長(zhǎng)因子),病毒產(chǎn)量與含血清體系相當(dāng),且能減少外源蛋白污染。

  • 傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70% 時(shí),消化處理后按 1:6 比例接種,離心速度 800rpm,24 小時(shí)貼壁率超 95%,避免過(guò)度融合(>80% 會(huì)導(dǎo)致成纖維細(xì)胞老化,病毒敏感性下降)。

  • 凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 3×10?個(gè) /mL,程序降溫至 - 80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 2 分鐘,接種后 48 小時(shí)換液,存活率可達(dá) 90%,建議每 20 代凍存一次以保持活力。

  1. 病毒培養(yǎng)與檢測(cè)操作

  • 豬瘟病毒培養(yǎng)優(yōu)化:細(xì)胞以 1×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)后換含 2% 血清的維持液,加入病毒液(MOI=0.1),37℃吸附 2 小時(shí)后換液,72 小時(shí)后收集上清測(cè)滴度,TCID??法結(jié)果變異系數(shù)<6%。

  • 多病毒鑒定方法:通過(guò)觀察細(xì)胞病變出現(xiàn)時(shí)間與形態(tài)差異初步區(qū)分病毒類型(豬瘟病毒 48-72 小時(shí)出現(xiàn)顆粒狀病變,口蹄疫病毒 24-48 小時(shí)出現(xiàn)融合性病變),結(jié)合間接免疫熒光試驗(yàn)可進(jìn)一步確認(rèn)病毒種類,準(zhǔn)確率達(dá) 90%。

四、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 豬源特異性:作為豬源細(xì)胞系,其病毒受體與代謝特征更接近豬體內(nèi)環(huán)境,研究結(jié)果的臨床相關(guān)性顯著高于猴源細(xì)胞系,尤其適合豬源病毒的天然感染機(jī)制研究。

  1. 病毒譜廣泛:對(duì)多種豬源病毒具有敏感性,可同時(shí)支持 DNA 病毒與 RNA 病毒復(fù)制,減少實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞系的更換成本,適合基層實(shí)驗(yàn)室與多病毒研究場(chǎng)景。

  1. 培養(yǎng)成本低:適應(yīng)低血清甚至無(wú)血清培養(yǎng),倍增速度快,大規(guī)模培養(yǎng)成本僅為 Vero 細(xì)胞的 1/3,適合資源有限的實(shí)驗(yàn)室與企業(yè)使用。

  • 局限性

  1. 形態(tài)特征限制:成纖維樣形態(tài)導(dǎo)致部分病毒的細(xì)胞病變不典型(如豬圓環(huán)病毒),需結(jié)合分子生物學(xué)方法輔助鑒定。

  1. 功能單一性:缺乏特定組織細(xì)胞的分化功能,如無(wú)法模擬豬呼吸道上皮的纖毛擺動(dòng),對(duì)呼吸道病毒的研究適用性有限。

  1. 種屬限制:對(duì)人類病毒的支持能力弱,不適合跨物種病毒傳播的深入研究,需與人類細(xì)胞系配合使用。

五、研究意義與展望
ST 細(xì)胞系的建立為豬源病毒研究提供了經(jīng)濟(jì)實(shí)用的工具,其在豬瘟、口蹄疫等疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用,直接推動(dòng)了養(yǎng)豬業(yè)的疫病防控水平,使我國(guó)豬瘟發(fā)病率從 20 世紀(jì) 80 年代的 30% 降至目前的 5% 以下。未來(lái),通過(guò)基因編輯技術(shù)增加特定病毒受體(如非洲豬瘟病毒受體),可拓展其病毒支持范圍;結(jié)合 3D 培養(yǎng)技術(shù)構(gòu)建 “豬睪丸 - 淋巴結(jié)" 復(fù)合模型,有望模擬病毒在體內(nèi)的擴(kuò)散路徑,為新型疫苗與抗病du藥物研發(fā)提供更貼近實(shí)際的平臺(tái)。作為豬病研究的 “工作 horse",該細(xì)胞系仍將在動(dòng)物病毒學(xué)與畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

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