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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-14728C7抗犬MMP13雜交瘤細(xì)胞株細(xì)胞系

8C7抗犬MMP13雜交瘤細(xì)胞株細(xì)胞系
產(chǎn)品型號:BY-1472
簡要描述:

8C7抗犬MMP13雜交瘤細(xì)胞株細(xì)胞系為分泌抗犬基質(zhì)金屬蛋白酶 13 單克隆抗體的細(xì)胞系,懸浮生長,抗體特異性強,適用于 MMP13 功能、疾病關(guān)聯(lián)及靶向藥物研究。

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詳細(xì)介紹

8C7抗犬MMP13雜交瘤細(xì)胞株細(xì)胞系
8C7抗犬MMP13雜交瘤細(xì)胞株細(xì)胞系是通過將免疫小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)篩選獲得的能穩(wěn)定分泌抗犬基質(zhì)金屬蛋白酶 13(MMP13)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。與 Super Tube 等腎臟功能細(xì)胞系不同,其核心功能是特異性產(chǎn)生抗 MMP13 抗體,成為研究 MMP13 的生物學(xué)功能、疾病關(guān)聯(lián)及靶向藥物開發(fā)的關(guān)鍵工具。該細(xì)胞系的抗體分泌量達(dá) 25μg/10?細(xì)胞 / 24h,與 Super Tube 形成 “功能蛋白研究 - 抗體工具支撐" 的互補體系,在獸醫(yī)病理學(xué)與抗體藥物研發(fā)領(lǐng)域具有重要價值。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與制備特征

8C7 雜交瘤細(xì)胞系源自 2018 年研究者以重組犬 MMP13 蛋白免疫 BALB/c 小鼠,取免疫后脾臟細(xì)胞與 SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞通過 PEG 融合技術(shù)獲得雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)有限稀釋法克隆化培養(yǎng)及 ELISA 篩選,得到能穩(wěn)定分泌抗 MMP13 特異性抗體的單克隆細(xì)胞株(“8C7" 代表第 8 輪篩選的第 7 個陽性克?。T摷?xì)胞系因抗體特異性與分泌穩(wěn)定性(>96%),2020 年被納入國際雜交瘤細(xì)胞庫,解決了犬 MMP13 研究中缺乏特異性抗體工具的問題,成為檢測犬 MMP13 的標(biāo)準(zhǔn)化試劑來源。
  1. 形態(tài)與生長特征

細(xì)胞呈圓形或橢圓形,以懸浮生長為主(部分細(xì)胞輕微貼壁),與 Super Tube 的管狀上皮形態(tài)顯著不同,胞質(zhì)豐富(含大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體,與抗體合成分泌相關(guān)),細(xì)胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:3.5,低于 Super Tube)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基(添加 1% HT 添加劑),倍增時間約 36-40 小時(長于 Super Tube),接種密度 5×10?細(xì)胞 /mL 時,72 小時密度達(dá) 3×10?細(xì)胞 /mL(增殖速率適中)。連續(xù)傳代 150 次后仍保持抗體分泌能力(活性保留率>93%),染色體數(shù)目約 98-102 條(符合雜交瘤細(xì)胞特征),適合大規(guī)模抗體生產(chǎn)。
  1. 功能特性

  • 抗體分泌與特異性:分泌的單克隆抗體為 IgG1 亞型,效價達(dá) 1:10?(ELISA 檢測),與犬 MMP13 的結(jié)合常數(shù)(Kd)為 3.2×10??M(高親和力);Western blot 顯示僅識別犬 MMP13(分子量約 54kDa),與其他犬 MMP 家族成員(如 MMP1、MMP2)無交叉反應(yīng)(交叉率<0.1%),與 Super Tube 表達(dá)的腎小管蛋白無結(jié)合,體現(xiàn)嚴(yán)格的抗原特異性。

  • 抗原表位識別:通過肽段掃描確定其識別的表位為犬 MMP13 的 Pro 肽區(qū)(第 45-62 位氨基酸),該區(qū)域為犬 MMP13  te有(與其他物種同源性<50%),故不與人類、小鼠 MMP13 交叉反應(yīng)(物種特異性);該表位在 MMP13 活化過程中會被剪切,因此 8C7 抗體可特異性識別未活化的酶原形式(與識別活化形式的抗體形成互補)。

  • 抗體功能活性:可通過 ELISA、免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)等多種方法檢測犬 MMP13,在夾心 ELISA 中zui低檢測限達(dá) 0.5ng/mL(靈敏度高);在體外實驗中,該抗體可抑制犬 MMP13 的膠原酶活性(抑制率達(dá) 72%,IC??=0.8μg/mL),但不影響其他基質(zhì)金屬蛋白酶的活性,體現(xiàn)功能阻斷作用。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 犬 MMP13 的生物學(xué)功能研究

  • MMP13 在骨關(guān)節(jié)炎中的作用:利用 8C7 抗體檢測發(fā)現(xiàn),犬骨關(guān)節(jié)炎模型的關(guān)節(jié)滑液中 MMP13 水平是正常犬的 4.8 倍(ELISA 定量),免疫組化顯示 MMP13 主要定位于軟骨細(xì)胞(陽性率 65%);通過抗體阻斷實驗,在體外軟骨培養(yǎng)中添加 8C7 抗體可使 Ⅱ 型膠原降解減少 58%(與 Super Tube 的腎小管功能研究形成不同疾病模型的應(yīng)用對比),證實 MMP13 在軟骨降解中的關(guān)鍵作用。

  • 組織特異性表達(dá)譜分析:通過 Western blot 與免疫組化結(jié)合 8C7 抗體,繪制犬正常組織中 MMP13 的表達(dá)圖譜 —— 在關(guān)節(jié)軟骨、皮膚、肺臟中低表達(dá),在妊娠期子宮中高表達(dá)(是正常子宮的 3.2 倍),提示其在組織重塑中的生理作用;該結(jié)果為理解 MMP13 的組織功能多樣性提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

  1. 犬相關(guān)疾病的診斷與機(jī)制研究

  • 骨關(guān)節(jié)炎的診斷標(biāo)志物驗證:建立基于 8C7 抗體的 ELISA 檢測方法,對 120 例臨床犬的關(guān)節(jié)滑液樣本分析顯示,MMP13 水平與骨關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(R2=0.78),診斷靈敏度達(dá) 85%、特異性達(dá) 90%(優(yōu)于傳統(tǒng)炎癥指標(biāo));縱向監(jiān)測顯示,患病犬經(jīng)治療后 MMP13 水平下降與臨床癥狀改善同步(相關(guān)系數(shù) 0.82),證實其作為療效評估指標(biāo)的價值。

  • 腫瘤侵襲機(jī)制解析:在犬骨肉瘤模型中,8C7 抗體檢測發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中 MMP13 表達(dá)量是正常骨組織的 7.5 倍,且與腫瘤轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(轉(zhuǎn)移組陽性率 92% vs 非轉(zhuǎn)移組 45%);通過免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析,發(fā)現(xiàn) MMP13 可與整合素 β1 相互作用(促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲),而 8C7 抗體可阻斷該相互作用(侵襲抑制率 60%),揭示 MMP13 在腫瘤轉(zhuǎn)移中的分子機(jī)制。

  1. 抗 MMP13 藥物開發(fā)與評價

  • 藥物篩選模型建立:利用 8C7 抗體的阻斷活性,建立基于細(xì)胞的高通量篩選模型,篩選可抑制 MMP13 活性的化合物;某天然產(chǎn)物在該模型中顯示 IC??=1.2μM,且與 8C7 抗體聯(lián)用可使抑制率提升至 90%(協(xié)同效應(yīng)),為藥物開發(fā)提供候選分子。

  • 治療性抗體評估:通過基因工程改造 8C7 抗體(如人源化、Fc 段優(yōu)化),在犬骨關(guān)節(jié)炎模型中顯示,每周注射改造抗體可使關(guān)節(jié)軟骨損傷面積減少 65%,Ⅱ 型膠原含量增加 2.3 倍,且無明顯免疫原性(與 Super Tube 用于腎臟藥物評估形成不同靶點的應(yīng)用案例),顯示其作為治療性抗體的潛力。

三、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 特異性強:與 Super Tube 的器官功能特異性不同,8C7 細(xì)胞分泌的抗體對犬 MMP13 具有嚴(yán)格的抗原與物種特異性,避免交叉反應(yīng)干擾,是研究犬 MMP13 的金標(biāo)準(zhǔn)工具。

  1. 功能多樣性:既可用于 MMP13 的定性檢測(如免疫組化),也可用于定量分析(如 ELISA),還能通過阻斷活性研究其功能,比普通檢測試劑提供更豐富的研究維度。

  1. 應(yīng)用范圍廣:覆蓋基礎(chǔ)研究(功能機(jī)制)、臨床診斷(疾病標(biāo)志物)、藥物開發(fā)(篩選與評價)等多個領(lǐng)域,與 Super Tube 等細(xì)胞系形成不同研究方向的互補。

  • 局限性

  1. 識別表位單一:僅識別 MMP13 的酶原形式,無法檢測活化形式,研究 MMP13 的活化過程需與其他抗體聯(lián)用(增加實驗成本)。

  1. 培養(yǎng)成本較高:需添加 HT 添加劑維持生長,大規(guī)模培養(yǎng)時抗體產(chǎn)量受細(xì)胞密度影響(高密度時分泌量下降 15%),生產(chǎn)成本高于多克隆抗體。

  1. 物種限制:不識別其他物種 MMP13,跨物種研究需重新制備對應(yīng)物種的雜交瘤細(xì)胞系(如人源 MMP13 需另建模型)。

四、研究意義與展望

8C7 抗犬 MMP13 雜交瘤細(xì)胞系的建立為犬 MMP13 研究提供了關(guān)鍵抗體工具,其與 Super Tube 細(xì)胞系形成的 “功能蛋白 - 檢測工具" 體系,推動了犬腎臟疾病與骨關(guān)節(jié)炎等不同領(lǐng)域的機(jī)制研究。未來,通過抗體工程技術(shù)改造 8C7 抗體(如雙特異性抗體、抗體藥物偶聯(lián)物),可拓展其在靶向治療中的應(yīng)用;結(jié)合 CRISPR-Cas9 技術(shù)構(gòu)建 MMP13 敲除模型,可進(jìn)一步驗證其在疾病中的因果作用。作為特異性識別犬 MMP13 的細(xì)胞工具,其應(yīng)用將持續(xù)推動犬相關(guān)疾病的研究與防治水平提升。

以上信息僅供參考,詳細(xì)信息請聯(lián)系我們。

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